image: 图片展示了高通量位点特异性临床糖蛋白组标志物研究新方法的具体流程，该方法包括蛋白质提取，TMT 标记，DMEN标记，包含阶梯碎裂能量的HCD及ETD组合的串级质谱碎裂方法和通过生物信息学手段筛选特异性糖基化标志物。 view more
Credit: ©《中国科学》杂志社
该团队长期从事蛋白质糖基化的质谱分析方法及应用研究，在本工作中，针对位点特异性糖肽高通量定性定量分析的挑战，通过引入三级胺化学标签增加糖肽的电荷数，从而解决了糖肽电荷转移碎裂(ETD)的碎裂效率问题；并通过等重同位素定量标签的引入整体增加了糖肽在高能碰撞诱导解离(HCD)的碎裂效率，实现了完整糖肽高通量、高准确性的定量研究。该方法一次质谱分析可以完成10例样品的同时采集，将传统方法的分析时间缩短了10倍；并且将糖肽的鉴定率提高了3倍。采用该方法研究了中国人群中90例不同阶段肝病患者血清中IgG 的完整N-糖肽，一共鉴定到了313条IgG 完整N-糖肽，是迄今为止IgG完整N-糖肽最大规模的数据集，并且也第一次绘制了肝脏疾病中IgG亚型特异和位点特异的糖基化修饰模式。报道了在由HBV感染的肝炎发展到肝硬化再到肝癌过程中IgG -糖基化动态变化，以及发现了具有高诊断能力的诊断标志物IgG1-H3N5F1和IgG4-H3N4，实现了对不同肝病患者的区分，并在另外45例样本中进行了靶向质谱的验证，为肝病的早期诊断及精准药物治疗提供了重要的研究思路与理论基础。此外，该方法也被用于研究了正常人血清的N-完整糖肽，仅从10 μL血清中检测到了约2000条完整糖肽，系统的表征了血清完整糖肽的高异质性特点，也揭示了血清中完整糖肽的分布规律。
研究详情请见原文：
High-throughput site-specific N-glycoproteomics reveals glyco-signatures for liver disease diagnosis
https://doi.org/10.1093/nsr/nwac059
Journal
National Science Review