RE-DSRNP高效编辑技术体系及其在制备WIP1基因编辑雄性繁殖障碍模型猪中的应用 (IMAGE)

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RE-DSRNP高效编辑技术体系及其在制备WIP1基因编辑雄性繁殖障碍模型猪中的应用

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报告RNA富集的双sgRNA核蛋白（reporter RNA enriched dual-sgRNA/CRISPR-Cas9 ribonucleoproteins, RE-DSRNP）高效编辑技术体系由双sgRNA编辑系统和报告RNA富集的核糖核蛋白（CRISPR-Cas9 ribonucleoproteins, RNP）编辑系统相结合。双sgRNA系统具有精确和高效编辑的特性，报告RNA富集的RNP系统具有transgene-free、编辑效率高、细胞毒性低、脱靶效应低的特性。因此，利用RE-DSRNP制备基因编辑核移植供体细胞无需单克隆筛选过程，将供体细胞的制备时间从原来的3-4周减少到1周。利用RE-DSRNP技术高效制备WIP1基因编辑雄性繁殖模型猪的应用：32头断奶克隆猪中，31头(97%)为WIP1基因编辑型，15头(47%)为预期的38bp DNA片段缺失纯合子类型；所有的克隆猪中均未检测到脱靶。WIP1基因编辑梅山猪表现出明显的雄性繁殖障碍表型。

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